東城觀察動物細胞顯微鏡-常用的轉染方法簡介
作者: 發布時間:2022-07-02 20:53:42點擊:1841
信息摘要:
大家好,這里是老上光顯微鏡知識課堂,在這里你可以學到所有關于顯微鏡知識,好的,請看下面文章:觀察動物細胞顯微鏡-常用的轉
大家好,這里是老上光顯微鏡知識課堂,在這里你可以學到所有關于顯微鏡知識,好的,請看下面文章:
觀察動物細胞顯微鏡-常用的轉染方法簡介
動物基因的轉移感染(transfection)作用是將動物的DNA或RNA(甚至是protein)轉送進入活體細胞中。
目前,基因轉染技術已成為研究基因轉殖(transgene)與表達之重要工具,轉染作用通常分為過渡性轉染
(transient transfection)及穩定性轉染(stable transfection)兩種類型。
前者是將DNA送入活細胞內,但DNA不會嵌入細胞的染色體中,其基因表達分析一般可在2~3天內進行。
后者是將DNA傳送入活細胞,被送入細胞內的DNA不是嵌入染色體DNA,而是成為基因附體(episome)存在于細胞內。
一般而言,環狀質體DNA之過渡性轉染效果較佳,而直線狀質體DNA則在穩定性轉染上效果較佳。
目前,基因轉染技術常被應用于基因表達之分析研究上,轉染前細胞株之選擇及測試技術頗為重要,
直接影響基因轉殖與表達研究的成敗。
常用的轉染方法有如下幾種:(1)磷酸鈣(calcium phosphate),(2)DEAE-dextran,(3)脂小體(liposome),
(4)電穿孔(electroporation),(5)顯微注射(microinjection),(6)病毒感染(retrovirus infection),
(7)基因槍(gene-gun)等。前兩項方法是以化學物質創造一個化學反應環境,讓DNA附著到動物細胞之表面,
然后DNA被動物細胞所吞噬。以脂小體為媒介的方式,其主要機制雖不全然清楚,
但DNA帶負電之磷酸根會與脂小體表面之正電荷結合,脂小體帶正電荷的部分又會與細胞表面帶負電荷的唾液酸
(sialic acid)結合,藉以進行轉染。電穿孔則藉電流方式進行。
顯微注射是在顯微鏡的幫助下,直接以微細針管將物質穿刺細胞打入。病毒感染是利用多種不同的病毒特性,
將DNA改造成病毒的一部份,另外病毒本身致癌基因或有害人類健康的基因也加以改造,再藉病毒感染方式送入基因。
基因槍是一種粒子槍法(microprojectile bombardment),欲送入的基因可涂裹在細微的粒子子彈上,
再被推壓如散彈方式射入目標細胞或組織中。除以上所提七種方式外,在植物基因轉殖(transgenic plant)上,
另可利用農桿菌媒介(Agrobacterium-mediated)方式,首先把基因接上載體,
再把載體導入農桿菌,藉由農桿菌為媒介,把外來基因導入植物細胞。
網站網友點擊量更高的文獻目錄排行榜:
點此鏈接
關注頁面底部公眾號,開通以下權限:
一、獲得問題咨詢權限。
二、獲得工程師維修技術指導。
三、獲得軟件工程師在線指導
toupview,imageview,OLD-SG等軟件技術支持。
四、請使用微信掃描首頁底部官主賬號!