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用高倍率的物鏡聚焦在螢光樣本上提高解析度
另一個(gè)將光學(xué)影像空間解析度向前邁進(jìn)一大步的是由德國 Stefan Hell 教授所發(fā)展的遠(yuǎn)場光學(xué)奈米顯微術(shù)。
這個(gè)技術(shù)是由掃瞄螢光顯微術(shù)出發(fā)，也即將激光用高倍率的物鏡聚焦在螢光樣本上，
移動(dòng)焦點(diǎn)在樣本上掃瞄并不斷收集每一點(diǎn)的螢光強(qiáng)度，累積起來即可組合成一張螢光影像。
重要的突破點(diǎn)在于想出要提高解析度，除了盡可能把聚焦光點(diǎn)弄小之外，能不能讓發(fā)出螢光的范圍縮小？
要知道，所謂繞射極限并沒有限制我們觀察距離很遠(yuǎn)的個(gè)別單分子螢光的能力，
但是當(dāng)這些螢光分子間距離近到小于繞射極限時(shí)，我們就會(huì)無法分辨?zhèn)€別分子位置。
假設(shè)有兩個(gè)同樣的螢光分子 A 和 B 靠的非常近，正常的聚焦光點(diǎn)一定會(huì)同時(shí)激發(fā)這兩個(gè)分子的螢光，
如果有某種辦法在激發(fā)時(shí)強(qiáng)迫旁邊的 B 不發(fā)光，只有 A 發(fā)光。接著再移動(dòng)樣本或光點(diǎn)使得 B 發(fā)光 A 不發(fā)光，
便有可能在空間上解析出 A 和 B 的影像來。因此，Hell 教授提出的概念基本上是想辦法將焦點(diǎn)附近的螢光分子的發(fā)光能力暫時(shí)抑制掉，
他將之命名為 STED
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