豐臺實習介紹之DNA制備與純化-光學顯微鏡常識
作者: 發布時間:2022-07-02 20:57:25點擊:2031
信息摘要:
大家好,這里是老上光顯微鏡知識課堂,在這里你可以學到所有關于顯微鏡知識,好的,請看下面文章:注射用DNA制備與純化材料:
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注射用DNA制備與純化
材料:
1. 經超高速離心分層抽取之 DNA
2. LMP agarose
3. 電泳設備
4. 5 M NaCl
5. 3 M NaOAc,pH 6.0
6. 酒精
7. TE
8. phenol,phenol/chloroform(1:1 v/v)等體積混合液
9. 65℃水浴槽
10. 1 ml 注射針筒及 0.22 mm 孔徑過濾膜
實驗步驟:
1. 依據質體構筑時的圖譜,選擇適當的限制酶將質體的骨架(backbone)切除。
2. 將切割完全之 DNA 以含 EtBr 的 LMP 進行電泳分離 DNA 及骨架。
3. 待分離完成后,在(長波)紫外燈下以刀片切下欲純化的膠,分裝至微量離心管,平均每管約400 ml。
4. 將微量離心管置 65℃ 水浴槽中 約5',觀察至膠完全融解。
5. 加入 20 ml 5M NaCl,再放入 65℃ 水浴槽中約1'。
6. 取出微量離心管后,依序以phenol萃取兩次、phenol/chloroform萃取一次、chloroform萃取一次。
7. 加入 1/20 體積之3 M NaOAc 及 2.5 倍體積之純酒精沉淀。
8. 離心14000 rpm,10'后,丟棄酒精。
9. 加入 70% 酒精。接著離心14000 rpm,1' 后去酒精。
10. 風乾后溶于適量的TE。
11. 取些許之DNA定量(以膠電泳方式比對 λ/H3 之 DNA 標記)。
12. 將 DNA 之濃度以 TE 調整至 10-20 ng/ml。
13. 以 0.22 mm 孔徑之過濾膜過濾后,分裝小量至微量離心管,并儲存于 -80℃,
爾后每進行一次顯微注射即取出一小管,且不再重覆使用。
血管正面的縫合更好紮實,因為背面會比較難縫。
看起來不難
實際應該很難XD
話說那臺比人還高的多人解剖體視顯微鏡
研究設備及器材
項目 器材名稱
數量
項目
器材名稱
數量
1
解剖顯微鏡
一臺
6
地毯
一塊
2
保麗龍球
數個
7
魔鬼氈
一片
3
蟑螂
數只
8
砝碼
數個
4
壓克力板
一片
9
木板
一塊
5
鐵絲
數支
10
飼育箱
四個
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