豐臺蚜蟲吸植物韌皮部汁液-昆蟲觀察顯微鏡

作者：發布時間：2022-07-02 20:47:58點擊：2257

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蚜蟲吸植物韌皮部汁液-昆蟲觀察顯微鏡

蚜蟲是常見的農業害蟲，以吸食植物韌皮部汁液維生，體內含有內共生菌Buchnera aphidicola，

兩者為的互利共生關系。Buchnera會提供宿主蚜蟲色胺酸（tryptophan）和苯丙胺酸（phenylalanine）

兩種芳香族胺基酸。3-deoxy-D-arabino- heptulosonate-7-phosphate synthase (DAHPS)

為芳香族胺基酸合成路徑所需要的酵素，aroH 為Buchnera DAHPS 的編碼基因。Buchnera aroH

缺乏轉錄及轉譯層級的調控，

其異位調控推測區和其他細菌沒有完全保守，且因為Buchnera基因的表現不需要隨生長環境的變化而改變，

是故認為Buchnera DAHPS可能不受回饋調控。由于Buchnera 無法在蚜蟲體外進行一般細菌培養實驗，

研究的目的在于建立E. coli 表現系統，來研究Buchnera DAHPS 酵素功能及回饋調控。實驗結果得知，

Buchnera DAHPS 可以補償大腸桿菌芳香族胺基酸突變株的營養缺失，測得Buchnera DAHPS對受質PEP及E4P的Km分

別為176 μM及290 μM，會受到最終產物tryptophan與phenylalanine的部份抑制，I0.5分別為19.7 μM

與168.4 μM，更大抑制百分比為61.7％與72.1％。進一步利用overlap-extension PCR建立帶有T7 promoter

的表現載體，轉型到大腸桿菌BL21 (DE3) T7 系統，雖然可以大量表現Buchnera DAHPS，

但表現蛋白出現在不可溶的部份，嘗試低溫誘導、共同表現及重新折疊，

仍無法改善其錯誤折疊及穩定使其恢復活性

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