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細胞切片染色的一些小常識-專業教學顯微鏡哪有賣
染色機轉
此方法可顯示組織切片之中性與酸性油脂。包含化學與物理
機轉，一方面由吸附反應，一方面由化學反應。
Nile Blue Solution有三種主要成分、
（1）暗藍色、水溶性Nile Blue之Oxazine鹽。
（2）Oxazine之游離基，其不溶于水，而溶于油脂，呈紅色。
（3）Nile Red Oxazine衍生物，其不溶于水而容于油脂。
一般說，后二者成分只存在少量，若加入少量稀硫酸煮沸可
增加其含量。中性油脂被Nile Blue Sulfate染成紅色。酸性油
脂可形成紅色或與染色液中之游離基形成鹽類，此鹽類為油
脂不溶性而呈藍色。其藍色可能蓋過紅色。
大部份脂肪酸成藍色染色反應。
染色方法
1、組織于Formol-Calcium固定48 ~72 hrs.。
2、以自來水沖洗之。
3、冷凍切片，6 ~8μm厚度切之。
4、于1 % Nile Blue Sulfate Solution，60℃，5 mins.。
5、以60℃蒸餾水洗滌之。
6、以1 % Glacial Acetic Acid洗30 secs.，以除非油脂結合之染料。
7、以60℃蒸餾水洗滌之。
8、以Glycerin Jelly封蓋。
染色結果
中性油脂（三酸甘油脂、膽固醇酯、類固醇） 紅色至粉紅色
酸性油脂（脂肪酸、磷酸） 藍色
細胞核 藍色
細胞質 淺藍色
本法用藥
Formol-Calcium
1 % Acetic Acid
1 % Nile Blue Sulfate
測定Nile Blue Sulate是否含有Nile Red Oxazine之
方法為加入一些Xylene，搖蕩均勻，若含Nile Red
成分則Xylene層于20 ~ 30 secs.內呈紅色。若
Xylene層不呈紅色，則將Nile Red Sulfate溶于5 %
Sulfuric Acid，回流蒸餾1 ~2 hrs.
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