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細胞培養相位差顯微鏡,細胞計數器,細胞培養箱廠商
材料：
A549 細胞株 (肺泡上皮細胞)
培養基：A549 培養基
F12K medium (Gibco Life) 500ml
胎牛血清
50ml
盤尼xi林/鏈霉素
5ml
清洗液：PBS (Phosphate buffered saline) 1X 溶液
蛋白質溶解液：Trypsin 0.5%
染料：trypan blue 0.04% (Gibco Life)
T75 培養瓶
儀器：
細胞計數器
相位差顯微鏡
細胞培養箱
方法：
1.將冷凍管置于 37℃水浴中迅速解凍后，以 70%酒精擦拭管壁及管口，在
無菌操作臺內用無菌吸管將細胞溶液放入 5—10ml 溫熱培養基，離心
1000rpm 5 分鐘，以去除冷凍保存劑 (DMSO)。
2.移去上清液，加入新鮮培養基，將細胞均勻混合于培養基中，移入 T75
flask。
3.放入培養箱內培養。(培養條件：37℃、5%CO2、濕度)
4.在解凍培養后 24 小時內更換培養基。
5.培養 3-4 天需更換培養基。
6.當細胞長滿培養瓶時，需進行繼代培養。
7.移去 A549 培養基，加入 10ml PBS 緩衝液洗滌細胞 2 次后移去。
8.加入 0.5ml 5% trypsin，使其能 rinse 所有細胞，之后放入培養箱內作用 3分鐘。
9.拿出后拍打培養瓶使細胞自瓶壁脫落，加入 10ml 新鮮培養基，均勻混合
后轉移至新的培養瓶中。
10.取 10μl 細胞懸浮液和 10μl 0.04% trypan bule，混合均勻，滴入計數片
中，計算角落四格之細胞數，帶入以下公式，即可算出細胞數
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