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使用正立顯微鏡觀察樣本厚度更好在1.5mm下
樣本限制：
1.厚度：顯微鏡可進行穿透及反射倍頻的觀察。
穿透－在 幾近透明 的斑馬魚胚體上可達 ~1.5mm 的穿透度，如要進行穿透倍頻的觀察，樣本厚度請限制在 1.5mm 以下。
(注：系統可觀察到的深度將會隨樣本不透明的程度而異 )
反射－較不受樣本厚度的影響，但訊號強弱會隨樣本對光散射程度不同而異。
2.顏色：若樣本本身帶有顏色，可能會導致穿透度變差，因此樣本盡量不帶較深的顏色。
3.活體：因本技術所觀測的為數百微米的范圍，一般情況所用的掃描速度為2sec/frame，欲進行活體試驗者，
請確定該活體的活動情況，及樣本固定 (mount) 的情況，以免因活體活動太劇烈而影響取像品質。
4.切片：建議先以測試用的樣本來進行測試，確定該樣本在本系統下不會受到破壞，以免使寶貴的切片受損。
(注:由于倍頻訊號容易受到樣品本身結構的影響，因此建議使用原本完整的樣品)。
5.特殊條件：因系統架設在室溫約20℃左右的實驗室內，使用正立顯微鏡，且尚未安裝無菌設備及恒溫裝置，
如使用者的樣本無法在以上所述之環境下作觀察，請事先告知以便進行討論。
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