豐臺(tái)觀察動(dòng)物細(xì)胞顯微鏡-常用的轉(zhuǎn)染方法簡(jiǎn)介
作者: 發(fā)布時(shí)間:2022-07-02 20:53:42點(diǎn)擊:1840
信息摘要:
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觀察動(dòng)物細(xì)胞顯微鏡-常用的轉(zhuǎn)染方法簡(jiǎn)介
動(dòng)物基因的轉(zhuǎn)移感染(transfection)作用是將動(dòng)物的DNA或RNA(甚至是protein)轉(zhuǎn)送進(jìn)入活體細(xì)胞中。
目前,基因轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究基因轉(zhuǎn)殖(transgene)與表達(dá)之重要工具,轉(zhuǎn)染作用通常分為過渡性轉(zhuǎn)染
(transient transfection)及穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染(stable transfection)兩種類型。
前者是將DNA送入活細(xì)胞內(nèi),但DNA不會(huì)嵌入細(xì)胞的染色體中,其基因表達(dá)分析一般可在2~3天內(nèi)進(jìn)行。
后者是將DNA傳送入活細(xì)胞,被送入細(xì)胞內(nèi)的DNA不是嵌入染色體DNA,而是成為基因附體(episome)存在于細(xì)胞內(nèi)。
一般而言,環(huán)狀質(zhì)體DNA之過渡性轉(zhuǎn)染效果較佳,而直線狀質(zhì)體DNA則在穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染上效果較佳。
目前,基因轉(zhuǎn)染技術(shù)常被應(yīng)用于基因表達(dá)之分析研究上,轉(zhuǎn)染前細(xì)胞株之選擇及測(cè)試技術(shù)頗為重要,
直接影響基因轉(zhuǎn)殖與表達(dá)研究的成敗。
常用的轉(zhuǎn)染方法有如下幾種:(1)磷酸鈣(calcium phosphate),(2)DEAE-dextran,(3)脂小體(liposome),
(4)電穿孔(electroporation),(5)顯微注射(microinjection),(6)病毒感染(retrovirus infection),
(7)基因槍(gene-gun)等。前兩項(xiàng)方法是以化學(xué)物質(zhì)創(chuàng)造一個(gè)化學(xué)反應(yīng)環(huán)境,讓DNA附著到動(dòng)物細(xì)胞之表面,
然后DNA被動(dòng)物細(xì)胞所吞噬。以脂小體為媒介的方式,其主要機(jī)制雖不全然清楚,
但DNA帶負(fù)電之磷酸根會(huì)與脂小體表面之正電荷結(jié)合,脂小體帶正電荷的部分又會(huì)與細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的唾液酸
(sialic acid)結(jié)合,藉以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。電穿孔則藉電流方式進(jìn)行。
顯微注射是在顯微鏡的幫助下,直接以微細(xì)針管將物質(zhì)穿刺細(xì)胞打入。病毒感染是利用多種不同的病毒特性,
將DNA改造成病毒的一部份,另外病毒本身致癌基因或有害人類健康的基因也加以改造,再藉病毒感染方式送入基因。
基因槍是一種粒子槍法(microprojectile bombardment),欲送入的基因可涂裹在細(xì)微的粒子子彈上,
再被推壓如散彈方式射入目標(biāo)細(xì)胞或組織中。除以上所提七種方式外,在植物基因轉(zhuǎn)殖(transgenic plant)上,
另可利用農(nóng)桿菌媒介(Agrobacterium-mediated)方式,首先把基因接上載體,
再把載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌,藉由農(nóng)桿菌為媒介,把外來基因?qū)胫参锛?xì)胞。
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